Ákvörðun á oxalsýruinnihaldi í ávöxtum og grænmeti með háþrýstivökvaskiljun (HPLC)

Ákvörðun um Oxalsýra Innihald í ávöxtum og grænmeti með háafköstu vökvaskiljun (HPLC)
1. Tilraunaregla og aðferðahönnun
Sem algeng lífræn sýra í ávöxtum og grænmeti hefur oxalsýruinnihald bein áhrif á bragð og næringargildi matvæla. Þessi tilraun notar öfuga fasa háafköstavökvaskiljun (RP-HPLC). Við súrar hreyfanlegar fasaaðstæður er oxalsýru aðskilin frá truflandi efnum með því að nota C18 litskiljunarsúlu. Útfjólubláskynjari stilltur á 210 nm er notaður til megindlegrar greiningar, byggt á útfjólubláum frásogseiginleikum karboxýlhópa í oxalsýrusameindum.
2. Staðalkúrfa og sýnishornsundirbúningur
Notast er við stigþynningaraðferð til að útbúa staðlaðar lausnir: 25,0 mg af oxalsýrutvíhýdrati eru vegin nákvæmlega og þynnt í 25 ml með útfjólubláu vatni til að fá 1 mg/ml stofnlausn. Þessi er þynnt í röð í röð staðlaðra lausna við 50, 100, 200, 400 og 800 µg/ml, þar sem hver styrkur er sprautaður inn í þríriti.
Við undirbúning sýnisins er notuð örbylgjuofnsútdráttur: vigtið 5,00 g af ávaxta-/grænmetisblöndu, bætið við 10 ml af 0,1 mól/L saltsýrulausn, hitið við 60°C í örbylgjuofni í 10 mínútur, síið í gegnum 0,45 µm himnusíu og safnið síuvökvanum til prófunar.
3. Hagnýting litskiljunarskilyrða
Færanlega fasinn er 0,01 mól/L kalíumdíhýdrógenfosfat stuðpúði (pH 2,5)-asetónítríl (95:5) kerfi, með rennslishraða 0,8 ml/mín og súluhita 35°C. Aðlögun á asetónítrílhlutfallinu sýnir að þegar lífræni fasinn fer yfir 10% styttist varðveislutími oxalsýrunnar í innan við 3 mínútur, en hámarkshalafrásog á sér stað. Við lokabestunarskilyrði er varðveislutími oxalsýrunnar 4,2 mínútur, sem nær fullri aðskilnaði frá aðliggjandi sítrónusýru og eplasýru (upplausn > 1,5).
4. Aðferðarstaðfesting
Línuleg staðfesting á svið sýnir gott línulegt samband milli flatarmáls tindsins og styrks á bilinu 10–1000 µg/mL (R² = 0,9993). Greiningarmörk (LOD), ákvörðuð með merkis-til-suðhlutfallsaðferð, eru 0,5 µg/mL. Í endurtekningarprófum er RSD fyrir sex endurteknar ákvarðanir á sama spínatsýninu 1,8%. Tilraunir með toppbata á þremur stigum (80%, 100% og 120%) gefa meðalbata upp á 98,2%, 102,4% og 97,8%, talið í sömu röð, sem uppfyllir kröfur um megindlega greiningu.
5. Greining á raunverulegum sýnum
Sex ávextir og grænmeti sem fást í verslunum voru prófuð: spínat (356 ± 12 mg/100 g), sellerí (215 ± 9 mg/100 g), tómatur (18 ± 2 mg/100 g), epli (6 ± 1 mg/100 g), banani (ekki greindur) og spergilkál (89 ± 5 mg/100 g). Samanburður við staðlaða aðferð landsvísu (GB 5009.277-2016) sýnir að hlutfallslegt frávik milli aðferðanna tveggja er minna en 5%, sem staðfestir áreiðanleika þessarar aðferðar. Sérstaklega sýnir HPLC aðferðin meiri næmni en hefðbundnar títrunaraðferðir við greiningu á sýnum með lágt innihald.
6. Lykilatriði
Hafið strangt eftirlit með pH-gildi við forvinnslu sýnisins. Ef pH útdráttarins fer yfir 3, mun útfelling kalsíumoxalats leiða til lélegra niðurstaðna í prófunum. Færanlega fasann ætti að útbúa ferskan daglega til að forðast saltútfellingu og stíflu í súlunni. Eftir hverjar 20 inndælingar skal skola súluna með asetónítríl-vatni (30:70) í 30 mínútur til að koma í veg fyrir skerðingu á virkni súlunnar. Fyrir sýni sem innihalda litarefni (t.d. rauðkál) er mælt með því að bæta við hreinsunarskrefi fyrir útdrátt í föstum fasa fyrir inndælingu.
7. Leiðbeiningar um notkun og útvíkkun
Þessa aðferð má einnig nota til að greina oxalsýru í líffræðilegum sýnum eins og þvagi og blóði. Með því að aðlaga samsetningu hreyfanlegra fasa (t.d. með því að bæta við tetrabútýlammóníumhýdroxíði) er hægt að ákvarða oxalsýru og umbrotsefni hennar samtímis. Í tengslum við massagreiningartæki er hægt að koma á nákvæmari aðferð til að greina snefilmagn. Í matvælaiðnaði getur þessi aðferð veitt mikilvægan gagnastuðning við val á afbrigðum með lágt oxalsýruinnihald og hagræðingu eldunarferla.